Microscòpia de Fluorescència
Serveis
La microscòpia de camp ampli il·lumina tota la mostra amb llum blanca o específica, permetent obtenir imatges 2D ràpides de tot el volum. Tot i això, també recull informació fora de focus, la qual cosa pot reduir contrast i nitidesa. Els nostres microscopis permeten fer, a més, imatges per camp clar i per contrast d’interferència diferencial (DIC). És una tècnica particularment indicada per estudis amb cèl·lules vives, estudis en seqüència temporal i cribatge d’alt rendiment.
Càmeres disponibles: Hamamatsu ORCA Flash 4.0 LT (sensor CMOS monocrom) i Axiocam 305 (sensor CMOS en color).
- Olympus IX81 (integrat a l’Olympus FV1000)
- Axio Observer 7 (integrat al ZEISS LSM 980)
Lisosomes transfectats amb tecnologia BacMam expressant GFP.
La microscòpia confocal utilitza un làser que escaneja la mostra punt a punt i un pinhole que elimina la llum fora de focus, permetent obtenir imatges 2D nítides i d’alt contrast de plans específics. Les imatges digitalitzades poden ser usades per a reconstruccions i anàlisis 3D d’objectes amb organització complexa. Tot i ser més lenta que la microscòpia de camp ampli, és especialment útil per imatges tridimensionals, anàlisi múltiplex, quantificació de fluorescència i estudis de co-localització.
- Olympus FV1000
- Leica TCS SP5
- Zeiss LSM 980
A) Rizoma de "Convallaria majalis". B) Detall d'una secció de ronyó de ratolí. Crèdit: Servei de Microscòpia, UAB
Cèl·lules HeLa marcades amb ConcanavalinaA-488, podent-se observar la membrana i el tràfic vesicular. Crèdit: SMiDRX, UAB
La TIRFM (Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy) utilitza una ona evanescent que excita fluoròfors només a la regió molt propera a la interfície vidre-aigua (~100 nm), aconseguint alta resolució axial. És una tècnica òptima per a estudis de membrana cel·lular en cèl·lules vives, interaccions moleculars a la interfície cèl·lula-substrat i dinàmica molecular in vitro.
- Mòdul TIRF integrat a l’Olympus FV1000
La microscòpia confocal de superresolució amb Airyscan 2 millora la resolució espacial i la sensibilitat respecte a la confocal tradicional (~140 nm lateral vs ~250 nm). Utilitza un detector multielement (Airyscan 2) que recull més fotons i redueix el soroll de fons, combinat amb processament computacional per obtenir imatges més nítides i detallades. Permet adquirir entre 2 i 8 línies d’imatge simultànies, incrementant la velocitat sense perdre qualitat, i oferint gran flexibilitat experimental. Això fa que sigui interessant per visualitzar orgànuls cel·lulars amb més detall, estudis de co-localització amb precisió millorada, seguiment de dinàmiques cel·lulars i reconstrucció de teixits o cèl·lules amb alta definició.
- Airyscan 2 integrat al ZEISS LSM 980