Preparació de Mostres

• Fixació amb aldehids
• Fixació amb osmi
• Deshidratació
• Inclusió en resines epoxi (EPON i Spurr) i acrílica (LR White)

Les mostres biològiques requereixen un processament específic perquè sigui possible observar-les amb TEM. Un processament complet generalment inclou: fixació amb aldehids, postfixació amb osmi, deshidratació, infiltració, inclusió en resina i polimerització, que resulten en la creació de blocs de resina epoxi que contenen les mostres i són aptes per ser tallats amb un ultramicròtom. En alguns casos, no són necessaris tots els passos i se’n pot dur a terme només una part.

El Comitè de Bioseguretat de la UAB obliga a entregar fixades les mostres amb risc biològic

• Fixació amb aldehids
• Fixació amb osmi
• Assecament de mostres per punt crític
• Assecament de mostres per mètode químic

Les mostres biològiques requereixen un processament específic perquè sigui possible observar-les amb SEM. Un processament complet generalment inclou: fixació amb aldehids, postfixació amb osmi, deshidratació i assecament per punt crític o per mètode químic (HMDS). En alguns casos, no són necessaris tots els passos i se’n pot dur a terme només una part.

El Comitè de Bioseguretat de la UAB obliga a entregar fixades les mostres amb risc biològic.

Es fan talls semifins (~0,5 µm) i ultrafins (~70 nm) de blocs tant de resina epoxi com d'acrílica. Els talls ultrafins són les seccions que s’observen al TEM

Immunomarcatge de proteïnes per observar-les amb microscòpia electrònica, on l’anticòs secundari està conjugat a una nanopartícula d’or. L’SMiDRX disposa de diversos anticossos secundaris. 

Abans del processament de les mostres, en cas de necessitar solucions tampó o de fixació, el personal tècnic les pot preparar.

El tractament amb descàrrega incandescent elèctrica (glow discharge) s’utilitza per netejar i modificar la càrrega superficial de les reixetes de TEM. D’aquesta manera, s’assegura una col·locació precisa de la mostra a la reixeta, així com una correcta vitrificació o tinció i assecament.

El recobriment de les mostres amb or inhibeix l’acumulació de càrrega i el dany tèrmic. A més, gràcies a l’alta conductivitat de l’or, aquest recobriment permet incrementar la relació senyal/soroll durant l’observació amb microscòpia electrònica de rastreig (SEM), i obtenir així una imatge de millor qualitat. En cas de dur a terme estudis analítics (EDX), s’aconsella recobrir les mostres amb carboni.

Per a l’observació amb microscòpia electrònica de transmissió (TEM), les mostres han de tenir un diàmetre de 3 mm i un gruix de 100 nm. Un primer aprimament mitjançant polit pla es realitza per rebaixar la mostra fins a 70 µm. A continuació, amb el polit còncau, s’aprima la part central de la mostra fins a gruixos de 15–20 µm.