El processat de mostres biològiques és laboriós i requereix de varis dies. El diagrama mostra un procés TEM convencional:
Un cop processades, les mostres s’han de tallar: primer, es generen els semifins, talls d’un gruix aproximat de mitja micra. Aquests talls serveixen per observar l’aspecte general de la mostra i escollir la zona d’interès a on es faran els ultrafins (aprox. 70 nm):
Serveis
Fixació amb aldehids
Fixació amb osmi
Deshidratació
Inclusió en resines epòxid (EPON i Spurr) i acrílica (LR White)
Les mostres biològiques requereixen d’un processat particular per tal que sigui possible observar-les al TEM. Un processament complet generalment inclou: fixació amb aldehids, post-fixació amb osmi, deshidratació, infiltració i inclusió en resina i polimerització; resultant en la creació de blocs de resina epòxid que contindran les mostres i seran aptes per ser tallades amb un ultramicròtom. A vegades, es pot donar al cas que no siguin necessaris tots els passos i se’n pot efectuar només una part.
El Comitè de Bioseguretat de la UAB obliga a entregar fixades les mostres amb risc biològic.
Fixació amb aldehids
Fixació amb osmi
Assecament de mostres per Punt Crític
Assecament de mostres per HMDS
Les mostres biològiques requereixen d’un processat particular per tal que sigui possible observar-les al SEM. Un processament complet generalment inclou: una fixació amb aldehids, una post-fixació amb osmi, deshidratació, i un assecat per punt crític o per químic (HMDS). A vegades es pot donar al cas que no siguin necessaris tots els passos i se’n pot efectuar només una part.
El Comitè de Bioseguretat de la UAB obliga a entregar fixades les mostres amb risc biològic.
Es realitzen talls semifins (~0.5 um) i ultrafins (~70 nm) tant de blocs de resina epòxid com acrílica. Els ultrafins són les seccions que s’observaran al TEM.
A) Immunogold en VLPs. Crèdit: Marc Garcia Trujillo & Francesc Gòdia, UAB; B) Immunogold en teixit vegetal. Crèdit: Adrià Bugeda & Juan José López Moya, CRAG
Immunomarcatge de proteïnes per a observar a microscòpia electrònica, on l’anticòs secundari està conjugat a una nanopartícula d’or. L’SM disposa de diversos anticossos secundaris.
En el cas de necessitar solucions tampó o de fixació per al previ processat de les mostres, les tècniques de l’àrea ho podran preparar.
