Nuevas técnicas serológicas para detectar anticuerpos frente al circovirus porcino
Desde el Centro de Investigación en Sanidad Animal (CRESA), con la colaboración del Departamento de Biotecnología del INIA, se han desarrollado dos nuevos tests serológicos (ELISAs) para detectar anticuerpos del circovirus, el agente responsable de muchas de las enfermedades que sufre la especie porcina. Estas dos nuevas técnicas se basan en proteínas recombinantes expresadas en larvas del insecto Trichoplusia ni. Para incrementar el rendimiento de estas proteínas, las larvas han sido inoculadas con baculovirus recombinantes y, hasta ahora, los resultados obtenidos demuestran el potencial de los dos ELISAs a gran escala.
El PCV2 es el agente etiológico responsable de varias enfermedades porcinas, comúnmente llamadas enfermedades porcinas asociadas a circovirus (PCVD). Entre ellas, la enfermedad más importante en la producción mundial de porcino desde un punto de vista económico es el síndrome del desmedro multisistémico posdestete (PMWS).
No existe un método rutinario para distinguir animales afectados por PMWS en cerdos vivos. Los ensayos de detección de anticuerpos frente a PCV2 desarrollados hasta hoy no tienen un valor diagnóstico aparente, ya que PCV2 es ubicuitario a nivel mundial y el modelo de seroconversión es similar en granjas afectadas y no afectadas por PMWS. Sin embargo, la serología de PCV2 ha sido muy útil para monitorizar el estado de infección por PCV2 en granjas y en estudios epidemiológicos y experimentales. Hasta la fecha, se han desarrollado diferentes tests serológicos, aunque todos ellos se han basado en partículas de PCV2 completo inactivado o proteínas Cap recombinantes.
El uso de insectos como biorreactores vivos es actualmente la alternativa más rentable para producir proteínas recombinantes mediante vectores de expresión en baculovirus. ALGENEX (Alternative Gene Expression S.L.), compañía “spin-off” del INIA, ha desarrollado baculovirus mejorados con una productividad incrementada, diseñados específicamente para incrementar la antigenicidad y la inmunogenicidad de las proteínas recombinantes expresadas.
Los nuevos métodos desarrollados muestran tres novedades principales:
a) El uso de una nueva estrategia relativamente económica para obtener un elevado rendimiento de proteínas recombinantes en larvas de insecto infectadas con baculovirus específicos recombinantes. Algunas de las ventajas de este sistema son un elevado rendimiento de proteínas recombinantes sin necesidad de condiciones estériles, fermentadores o medios de cultivo durante el proceso de producción.
b) El desarrollo de un nuevo ELISA capaz de detectar de forma consistente anticuerpos contra la proteína Rep de PCV2 en cerdos infectados con PCV2. Junto con el ELISA específico para Cap, añade un nuevo entendimiento al diagnóstico de PMWS. Los resultados del estudio realizado han demostrado el potencial de estos dos ELISAs para estudios serológicos a gran escala. Además, también representa el primer estudio longitudinal de inducción de anticuerpos anti-Cap y anti-Rep en granjas afectadas por PMWS, desde la primera semana de edad hasta la ocurrencia de la enfermedad.
c)El potencial del ELISA como método de diagnóstico capaz de distinguir animales infectados de vacunados (DIVA).
Referencias
"Development of two Trichoplusia ni larvae-derived ELISAs for the detection of antibodies against replicase and capsid proteins of porcine circovirus type 2 in domestic pigs" (Eva Pérez-Martín, Llorenç Grau-Roma, Jordi M Argilaguet, Miquel Nofrarías, José Angel M Escribano, Silvia Gómez-Sebastián, Joaquim Segalés, Fernando Rodríguez). J Virol Methods. 2008 Dec;154(1-2):167-74.
