Reproducción y Lactación

Estudio de la glándula mamaria (desarrollo, estructura y metabolismo) y los efectos de la dieta y el ordeño en la producción de leche y la salud de la ubre en ovejas, cabras y vacas.

Investigadores e investigadoras:
Elena Albanell Trullàs
Gerardo Caja López
Ramon Casals Costa
Francesc Xavier Such Martí

Proyectos:

La Producción in vitro de embriones (PIVE) es una tecnología reproductiva cuyo objetivo es incrementar drásticamente la capacidad reproductiva de las hembras selectas mediante la utilización de los oocitos recuperados del ovario. Nuestros proyectos  están centrados en el estudio de la  calidad del oocito, probando diferentes medios de cultivo in vitro, analizando las características molecular del citoplasma de los oocitos  y buscando biomarcadores que nos predigan su calidad. El principal objetivo de nuestro laboratorio es producir embriones de buena calidad y que sean transferibles a hembras receptoras.

Investigadores e investigadoras:
María Teresa Paramino Nieto
Maria Dolors Izquierdo Tugas


Proyectos:

Estudio del efecto de la competencia de distintos tipos de oocitos caprinos sobre la producción in vitro de embriones en sistemas bifásicos de maduración con OSF (Oocytes Secreted Factors) (Referencia: PID2020-113266RB-I00)

La producción de cabras, especialmente las de razas lecheras, podría ser una ganadería interesante en condiciones ambientales difíciles y de escasez de agua.

La producción in vitro de embriones (PIVE) es una herramienta de gran interés para los programas de mejora animal. En estudios anteriores hemos observado una relación directa y positiva entre el diámetro del oocito, el diámetro del folículo y el desarrollo hasta blastocisto. En nuestro proyecto anterior (AGL2017-85837-R) hemos estudiado un sistema de maduración bifásico basado en 2 etapas: 1) medio pre-MIV utilizando 200 nM CNP (péptidos natriuréticos tipo C) más estradiol con objeto de parar la meiosis y 2) seguida por el paso de los oocitos pre-madurados a una maduración in vitro (MIV) convencional. Con este sistema bifásico hemos aumentado significativamente el porcentaje de blastocistos obtenidos de oocitos de cabras de 1 a 2 meses de edad (del 17% al 30% de blastocistos). En el presente proyecto vamos a comprobar la respuesta de los oocitos de diferentes calidades (oocitos de hembras adultas y de prepúberes recuperados de folículos mayores y menores de 3 mm) a los tratamientos de MIV bifásicos y enriquecidos con 2 Oocyte Secreted Factors (OSF), como son la proteína morfogenética ósea 15 (BMP15) y el factor de diferenciación del crecimiento 9 (GDF9). Estos OSF actúan mejorando la comunicación entre las células del cúmulo y los oocitos. Según la hipótesis de Richani y Gilchrist (2018), los oocitos van mejorando su competencia para el desarrollo a medida que crecen y esto se observa porque adquieren la capacidad de respuesta al péptido EGF (Epidermal Growth Factor) a través de los moduladores del AMPc (como CNP), junto con GDF9 y/o BMP15. En consecuencia, el objetivo del presente proyecto es estudiar en las 3 calidades de oocitos de cabra el efecto del sistema bifásico de MIV, junto con la adición de los OSF BMP15 y GDF9 a concentraciones de 50 y 100 ng/mL en la pre-IVM, en su capacidad para producir embriones. En estos estudios analizaremos los siguientes parámetros: el estadio nuclear con Hoescht, el crecimiento de oocitos por tinción con Azul Cresil Brillante (BCB), la concentración de AMPc en COCs y células de cúmulos por RIA, las uniones oocitos células del cúmulo (GAPJ) por microinyección de Amarillo Lucifer Fluorescente, las concentraciones de ROS y GSH (glutatión) en los oocitos, ARN total, ADN mitocondrial por qPCR, y apoptosis de las células del cúmulo y oocitos mediante Anexina. Finalmente, la competencia de los oocitos se evaluarà, después de la fecundación in vitro (FIV)/Activación Partenogénica (AP) y el cultivo de embriones, por el porcentaje de blastocistos a los 8 días postinseminación/postactivación. El último objetivo será conocer si diferentes ovocitos necesitan diferentes protocolos de maduración in vitro.

 

Sistemas de maduración bifásica para mejorar la competencia embrionaria de los oocitos caprinos (AGL2017-85837-R)
El principal problema de los programas de Producción in vitro de Embriones (PIVE) es que sus resultados son variables e impredecibles debido en parte a la espontánea e incontrolada reiniciación de la meiosis que se produce inmediatamente después de liberar el oocito del folículo. Además, en oocitos procedentes de folículos pequeños y medianos, como en el caso de las hembras prepúberes, el citoplasma del oocito es inmaduro y poco competente para producir un embrión viable. Estos dos factores, desconocimiento del estado nuclear al iniciarse la MIV y citoplasma inmaduro, nos produce un oocito poco competente para la PIVE. En colaboración con la Universidad de Adelaida, el presente proyecyo pretende preparar un protocolo de PIVE basado en una maduración bifásica con 2 etapas: 1) Premaduración con compuestos, como el CNP, capaces de parar la meiosis con el objeto de permitir un mayor crecimiento y preparación del oocito, y con Forskolin y IBMX, compuestos que permetirían un incremento del cAMP intracitoplasmático de los COCs y el mantenimiento de las uniones GAP. En la etapa 2, los oocitos premadurados pasarían a las condiciones de MIV convencional.  Este sistema bifásico de MIV será comprobado en producción de embriones utilizando la FIV, la ICSI y la Activación Partenogénica. Además, y debido al largo proceso de este protocolo de PIVE, los radicales de oxigeno (ROS) podrían provocar un factor de toxicidad en las células. Así, para intentar controlar la producción y efecto de los ROS, estudiaremos el efecto de la adición en los medios FIV y de cultivo embrionario de distintas dosis de melatonina, poderoso compuesto de limpieza de los ROS, sobre la producción y calidad de los blastocistos. La última finalidad es diseñar un protocolo de MIV que nos permita mejorar la competencia de oocitos de baja calidad, como son los de prepúberes, provinientes en su mayoria de folículos muy pequeños. Finalmente el ultimo objetivo es diseñar un protocolo de maduración bifásico que nos proporcione mejores resultados de producción de blastocistos en cantidad y calidad.

Personas de contacto: María Teresa Paramio y Dolors Izquierdo (Teresa.Paramio@uab.cat  , Dolors.Izquierdo@uab.cat)